展示技术广泛用于抗体的高通量筛选。目前常用的噬菌体展示和酵母展示技术主要用于展示单链可变区抗体片段(ScFv),通过展示技术筛选出的抗体片段,需要进行结构转换,将抗体片段结构转换成IgG全长抗体结构,应用于抗体药物开发。但是通过结构转换形成的IgG全长抗体可能会失去活性,需要对转换后的IgG全长抗体进一步进行体外成熟优化,才能筛选出具有高亲和力的抗体。最直接有效的策略是通过展示IgG全长抗体,进行体外亲和力成熟优化筛选。动物细胞可以用于展示IgG全长抗体,进行体外亲和力成熟优化筛选。但是与噬菌体展示和酵母展示技术相比,动物细胞展示技术通量小,操作难度大,周期长,成本高,无法高效达到体外亲和力成熟的目标。
我们基于糖工程毕赤酵母技术,用糖工程毕赤酵母代替动物细胞,开发出IgG全长抗体酵母展示技术平台,用它可以代替噬菌体和传统的酵母展示技术,构建大容量人源IgG全长抗体库,进行高通量亲和力体外成熟筛选,选出的高亲和力、高表达IgG全长抗体不需要结构形式改变,可以直接表达生产进行动物实验和临床实验,是一种稳定高效的抗体亲和力成熟系统。
我们是目前全球少数几家能提供IgG全长抗体酵母展示技术的企业,可以对外提供涵盖抗体人源化、抗体亲和力成熟、抗体表达生产在内的抗体基因工程改造一站式服务。
IgG全长抗体酵母展示技术具有其他展示技术所没有的潜在优势:
1、糖工程毕赤酵母具有类似于动物细胞的真核表达系统质量控制机制,能够确保抗体的正确空间结构折叠,具有人源N-糖基化等多种翻译后加工功能,因而展示的IgG抗体在分子结构、理化特性 和生物学功能方面最接近于天然抗体,可以直接用于动物实验和临床试验。但是噬菌体是原核表达系统,只能展示ScFv等抗体片段,通过结构转换形成的IgG抗体可能会失去活性。
2、与动物细胞展示技术相比,IgG全长抗体酵母展示技术具有抗体库容量大,操作简单,周期短,成本低,能高通量筛选IgG全长抗体。
3、酵母展示系统采用FACS分选技术,基于IgG抗体亲和力及展示水平进行筛选,可以消除表达水平不同引起的偏差,而且能区分亲和力差异很小的克隆。但是噬菌体展示筛选抗体时,表达水平的不同会影响抗体亲和力的筛选。
4、采用FACS分选技术能够一次直接分选高、中、低亲和力的克隆。
5、通过使用双染色的FACS,可以直接用酵母展示抗体确定抗体亲和力,不需要进行耗时的亚克隆、表达和纯化。